ICS 65.020.20 CCS B 05 扬 3210 州 市 地 方 标 准 DB 3210/T 1119—2022 蕙兰种苗组培生产技术规程 Technical regulation for the tissue culture of Cymbidium faberi seedlings 2022 - 06 - 10 发布 2022 - 06 - 10 实施 扬州市市场监督管理局 发 布 — DB 3210/T 1119 2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江苏里下河地区农业科学研究所提出。 本文件由扬州市农业农村局归口。 本文件起草单位：江苏里下河地区农业科学研究所。 本文件主要起草人：孙叶、刘红、魏晓羽、刘春贵、马辉、张甜、袁媛、李风童、包建忠。 I — DB 3210/T 1119 2022 蕙兰种苗组培生产技术规程 1 范围 本文件规定了蕙兰种苗组培生产的培养基配制和灭菌、种苗组培、试管苗驯化、试管苗移栽、病虫 害防治、出圃规格及生产记录要求。 本文件适用于蕙兰种苗组培生产。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 8321.10 农药合理使用准则（十） NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 培养基配制和灭菌 4.1 培养基配制流程 按培养基配方称取一定量MS培养基干粉、蔗糖、蛋白胨、激素和琼脂粉，加入一定量的蒸馏水加热 至琼脂完全溶解后，用1 mol/L的氯化氢或1 mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至5.4～5.8，趁热把30 ml～ 50 ml培养基分装于组培瓶中。 4.2 培养基配方 种子播种配方：1/2 MS+0.5 mg/L（萘乙酸）+20 g/L（蔗糖）+0.5 g/L（蛋白胨）+0.5 g/L（活性碳）， pH值 5.1～5.4。 茎尖诱导配方：1/2 MS+1.5 mg/L（6-苄氨基腺嘌呤）+1.5 mg/L（萘乙酸）+20 g/L（蔗糖）+6 g/L （琼脂），pH值 5.1～5.4。 增殖配方：1/2 MS+0.5 mg/L（萘乙酸）+蔗糖20 g/L（蔗糖）+0.5 g/L（蛋白胨）+0.5 g/L（活性碳） +6 g/L（琼脂），pH值 5.1～5.4。 诱芽配方为：1/2 MS+（1～3）mg/L（6-苄氨基腺嘌呤）+（0.5～1） mg/L（萘乙酸）+20 g/L（蔗 糖）+0.5 g/L（蛋白胨）+6 g/L（琼脂），pH值 5.1～5.4。 生根配方：1/2 MS+（0.2～0.5） mg/L（萘乙酸）+20 g/L（蔗糖）+0.5 g/L（蛋白胨）+0.5 g/L（活 性碳）+6 g/L（琼脂），pH值 5.1～5.4。 4.3 高压灭菌 1 — 在高压蒸汽灭菌器内压力0.12 MPa，121 ℃灭菌30 min。接种工具（包括镊子、手术刀、垫盘等）可 随培养基一起灭菌，灭菌后放置接种室，接种过程中采用酒精灯灼烧或高温灭菌器进行灭菌。 DB 3210/T 1119 2022 5 种苗组培 5.1 原球茎诱导培养 5.1.1 种子繁殖 5.1.1.1 蒴果采收与保存 选择授粉后5个月～6个月、种皮微黄的蒴果采收备用，2个月内播种的蒴果保存于4 ℃低温冰箱， 12个月内播种的蒴果保存于-20 ℃低温冰箱。 5.1.1.2 蒴果灭菌 蒴果用75%酒精表面消毒后放置于无菌接种室超净工作台，放入0.1%的氯化汞溶液浸泡10 min，取 出晾干，浸入95%酒精3 s，取出即刻在酒精灯上点燃，待蒴果表面酒精燃烧完，放置于无菌垫盘备用。 5.1.1.3 种子无菌播种 在超净工作台上用解剖刀切开朔果，取出种子，放入高温灭菌后的液体播种培养基，摇晃组培瓶使 种子浸泡并分散于营养液中，一个蒴果无菌播种8瓶～10瓶。 5.1.1.4 种子萌发 无菌播种后暗培养，室温23 ℃，3个月～12个月后种子开始萌发形成原球茎。 5.1.2 茎尖快繁 5.1.2.1 茎尖采集和消毒 5月～6月，选取蕙兰优良品种生长健壮、无病虫害植株的2.0 cm～3.0 cm新生芽，用锋利刀片从母 株的基部切取芽，用中性洗涤剂浸泡洗涤后，再用流水冲洗干净，剥去外层苞片。在超净工作台上用75% 酒精消毒30 s，无菌水冲洗3次，后用0.1%的氯化汞溶液消毒5 min，无菌水冲洗3次。 5.1.2.2 原球茎诱导 在超净工作台上将已经消毒的新芽置于无菌接种盘上，剥去新生芽周围的所有叶片，用解剖刀剥取 2 mm～3 mm茎尖接种于诱导培养基，室温23 ℃，光照强度1500 lux，每天光照时间8 h，2个月～3个月后 诱导出原球茎。 5.2 继代培养 原球茎转继代培养基，室温23 ℃，光照强度2000 lux，每天光照时间10 h，培养2个月～3个月后生 长成为根状茎，根状茎在生长过程中，又形成多个突起，生成丛生型根状茎，再将根状茎切割后转移到 增殖培养基，3个月～6个月继代培养一次。 5.3 芽分化培养 将丛生型根状茎转入诱芽培养基，温度23 ℃，光照强度3000 lux，每天光照时间12 h，培养3个月～ 6个月后小芽生长至2 cm～3 cm。 2 — DB 3210/T 1119 2022 5.4 生根培养 待芽高2 cm～3 cm时转入生根培养基，培养温度23 ℃，光照强度3000 lux，每天光照时间10 h，培 养3个月～4个月后，组培苗生长成高8 cm～10 cm，根长5 cm～6 cm。 6 试管苗驯化 6.1 试管苗规格 试管苗株高8 cm～10 cm，叶数3片～4片，根长5 cm～8 cm，根数2条～3条。 6.2 驯化条件 光照强度3000 lux～5000 lux，每天光照时间8 h～10 h，适宜温度20 ℃～25 ℃，环境清洁。 6.3 驯化方法 将培养瓶旋松盖子后放置于培养架上，7 d～14 d即可。 7 试管苗移栽 7.1 基质 颗粒长1 mm～6 mm泥炭土。 7.2 花盆 口径10 cm，高10 cm～15 cm的塑料盆，每盆栽3株～4株。 7.3 出瓶方法 用镊子从培养瓶中慢慢地取出组培苗，用清水漂洗根部琼脂培养基干净后移栽。 7.4 移栽条件 栽培适宜温度20 ℃～25 ℃；湿度80%～85%；光照强度5000 lux～6000 lux；每天光照时间8 h～10 h。 7.5 水肥管理 浇水时间上午8：00～10：00；浇水频率，春、秋季7 d左右一次，夏季5 d左右一次，冬季10 d左右 一次；基质开始泛白浇水，浇则浇透。移栽3月后，每20 d左右喷灌一次水溶性复合肥（N：P：K=20： 20：20）2000倍液；施肥和浇水交替进行。 8 病虫害防治 病虫害防治遵循“以防为主、综合防治、农药交替”的使用原则。农药使用应符合GB/T 8321.10 规定，防治方法应符合NY/T 2306规定。 9 出圃规格 3 — 2株以上，苗健壮、挺拔、叶色有光泽；株高20 cm以上、每株叶数4片以上、根系发达健康、无病 虫害危害症状。 DB 3210/T 1119 2022 10 生产记录 建立生产记录档案，档案保存不少于2年。 4