ICS 65.020.20 B 05 备案号： 湖 DB42 北 省 地 方 标 准 DB42/T 1405—2018 湖北主要药用植物石斛组培育苗技术规程 Technical regulations of tissue culture for the main medicinal Dendrobium in Hubei （报批稿） 2018-09-04 发布 湖北省质量技术监督局 2018-11-24 实施 发 布 DB42/T 1405—2018 目 次 前言 ............................................................................... III 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 种类选择 .......................................................................... 1 5 种苗繁育 .......................................................................... 2 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 蒴果采收 消毒播种 增殖培养 分化培养 生根培养 ...................................................................... ...................................................................... ...................................................................... ...................................................................... ...................................................................... 2 2 2 2 2 6 炼苗与健化 ........................................................................ 2 6.1 搭建荫棚 ...................................................................... 2 6.2 炼苗 .......................................................................... 2 6.3 健化 .......................................................................... 3 7 病虫害防治 ........................................................................ 3 7.1 防治原则 ...................................................................... 3 7.2 主要病害及防治方法 ............................................................ 3 7.3 主要虫害及防治方法 ............................................................ 3 8 种苗出圃 .......................................................................... 3 8.1 出圃时间 ...................................................................... 3 8.2 种苗规格 ...................................................................... 4 8.3 出圃要求 ...................................................................... 4 附录 A（资料性附录） 药用石斛主要病害防治方法 ........................................ 5 附录 B（资料性附录） 药用石斛虫害防治方法 ............................................ 6 I DB42/T 1405—2018 II DB42/T 1405—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖北省林业科学研究院提出。 本标准由湖北省林业厅归口管理。 本标准起草单位：湖北省林业科学研究院、湖北宗坤石斛科技开发有限公司、英山县药材和茧丝绸 产业化办公室、英山县科技局。 本标准主要起草人：陈慧玲、刘宗坤、杨彦伶、张新叶、刘正言、庞宏东、李振芳、刘涛、陈华超、 马林江、彭婵。 III DB42/T 1405—2018 湖北主要药用植物石斛组培育苗技术规程 1 范围 本标准规定了湖北主要药用植物石斛组培育苗的术语与定义、种类选择、种苗繁育、炼苗与健化、 病虫害防治及种苗出圃。 本标准适用于湖北省范围内主要药用植物石斛的组培育苗生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321.1 农药合理使用准则(一) GB/T 8321.2 农药合理使用准则(二) GB/T 8321.3 农药合理使用准则(三) GB/T 8321.4 农药合理使用准则(四) GB/T 8321.5 农药合理使用准则(五) GB/T 8321.6 农药合理使用准则(六) GB/T 8321.7 农药合理使用准则(七) GB/T 8321.8 农药合理使用准则(八) GB/T 8321.9 农药合理使用准则(九) GB/T 8321.10 农药合理使用准则(十) NY/T 1276 农药安全使用规范 总则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 石斛菌根共生菌 Dendrobium mycorrhiza symbiotic fungus 一种或几种侵染石斛属植物根部，与之共生的内生真菌，石斛属植物种子萌发、幼苗生长的碳源、 水源以及成年植株部分营养均依赖这些真菌来获取。 3.2 石斛菌根共生菌液 liquid of Dendrobium mycorrhiza symbiotic fungus 药用植物石斛进行组织培养时，在其培养基中添加的由石斛菌根共生菌经无菌分离培养后得到的液 体菌剂。 3.3 1 DB42/T 1405—2018 炼苗 hardening off 采取通风、降温、适当控水等措施对设施培育的幼苗进行强迫锻炼，提高抗性，使其定植后能够迅 速适应陆地的自然环境条件的过程。 4 种类选择 选 择 霍 山 石 斛 (Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng) 、 铁 皮 石 斛 (Dendrobium officinale Kimura et Migo)、细茎石斛(Dendrobium monilifolme(L.) Sw)为主要栽培种。 注：石斛属植物约1500种，中国有75种2个变种，湖北有8种，以上3种在湖北栽培表现好。 5 种苗繁育 5.1 蒴果采收 对现有种子园中多糖含量高、高产的2 a～3 a生健康植株进行人工授粉后精心管理，于9月～11月 采收无病虫害、无机械损伤的成熟蒴果，以果皮绿黄色未开裂为宜。 5.2 消毒播种 5.2.1 消毒 在超净工作台上将蒴果表面用70 %酒精棉球擦拭干净后，浸泡于70 %酒精中30 s，再用0.1 %升汞 消毒15 min，无菌水冲洗5 次后用无菌滤纸吸干表面水分。 5.2.2 播种 在超净工作台上用灭菌手术刀沿中缝线纵向切开消毒好的蒴果，刮出种子于适量的无菌水中分别制 成悬浮液，摇匀悬浮液后，吸取适量悬浮液加入装有1/2 MS +1 %石斛菌根共生菌液培养基的培养瓶中， 并使之均匀分布，用封口膜封口。 5.2.3 培养条件 将已播种的培养瓶放入温度为（25±1）℃，光照10 h～12 h、光照强度1500 1ux～2000 1ux组培 室培养。 5.3 增殖培养 30 d后将培养基上萌生的原球茎转接到MS + 2.0 mg/l 6-BA + 0.2 mg/l NAA + 10 %香蕉汁 + 1 % 石斛菌根共生菌液的增殖培养上培养，培养条件参照本标准5.2.3执行。 5.4 分化培养 60 d后将增殖的原球茎转接到MS + 0.6 mg/l 6-BA + 1.2 mg/l NAA + 10 %香蕉汁的分化培养基上 培养，培养条件参照本标准5.2.3执行。 5.5 生根培养 60 d后将分化的丛生芽转接到1/2 MS + 1.0 mg/l NAA + 15 %马铃薯 + 2 %石斛菌根共生菌液的生 根培养基上培养，培养条件参照本标准5.2.3执行。 2 DB42/T 1405—2018 6 炼苗与健化 6.1 搭建荫棚 选择地势平坦处搭建长40 m～50 m、宽8 m、高3.3 m的钢架大棚，覆盖避雨薄膜和遮光度75 %～80 % 的遮阳网，棚内安装微喷雾设备。 6.2 炼苗 组培苗生根培养60 d后即可开瓶炼苗移栽。将苗高3 cm～4 cm、长小叶5片～8片，根4 条～5 条的 试管苗带培养瓶一起移至荫棚内，进行常温闭瓶炼苗，7 d后