DB41 河 南 省 地 方 标 准 DB41/T 769—2012 红掌组培苗繁育技术 2012-12-18 发布 2013-02-18 实施 河南省质量技术监督局 发 布 DB41/T 769-2012 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河南省花卉协会提出并归口。 本标准起草单位：济源市农业科学研究所。 本标准主要起草人：王梅、陈丽、刘星明、李铭、尹国红、牛立平、郝浩浩。 本标准参加起草人：成东梅、张庆社、牛小沛、李冰、汤曙光、田瑞昌、原维梓。 1 DB41/T 769-2012 红掌组培苗繁育技术 1 范围 本标准规定了红掌组培苗的培养基准备、外植体选择、接种与培养、炼苗、移栽及成苗标准内容。 本标准适用于河南省境内红掌组培苗繁育技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4285 农药安全使用标准 GB 17323-1998 瓶装饮用纯净水 中华人民共和国农业部公告 第 199 号（2002） 3 培养基准备 3.1 培养容器准备 3.1.1 培养容器的清洗 3.1.1.1 新的培养容器直接放入洗洁精或洗衣粉溶液中浸泡；用过且无污染培养容器先倒掉容器中的 残留物再浸泡；污染的培养容器先按照4.3的要求灭菌后倒掉污染物再浸泡；浸泡时间不低于6h。 3.1.1.2 洗刷瓶内外残留物，用清水再冲洗 3 遍～5 遍，放入专用框中晾干。 3.1.2 接种器械的清洗 3.1.2.1 清除接种器械上的残留物，在洗洁精溶液中浸泡数分钟。 3.1.2.2 洗刷干净后用清水冲洗 3 遍～5 遍并晾干。 3.1.2.3 用棉布或纸包好，按 3.3 的要求灭菌。 3.2 培养基配制 3.2.1 母液配制 3.2.1.1 MS 培养基母液的配制见附录 A。 3.2.1.2 植物生长物质 KT、6-BA 用少量 0.1 mol/L 的 HCI 溶解后用蒸馏水定容，IBA、NAA 用少量的 95%的酒精或 0.1mol/L NaOH 溶解后用蒸馏水定容。 3.2.2 培养基制作 3.2.2.1 依据培养基成分准备好蒸馏水、蔗糖、琼脂和各类母液。 3.2.2.2 加定容总量 2/3 左右的水（水符合 GB 17323-1998），再加琼脂粉放入锅中加热搅拌使其融 化。 1 DB41/T 769-2012 3.2.2.3 琼脂粉融化后，加入蔗糖，搅拌使蔗糖溶解。 3.2.2.4 蔗糖溶解后，停止加热，放入吸取的各类母液，并充分搅拌。 3.2.2.5 搅拌均匀后，加入蒸馏水混合定容并搅拌均匀。 3.2.2.6 定容后，用 pH 计或 pH 试纸测 pH 值，用 0.1mol/L 的 NaOH 或 0.1mol/L 的 HCl 调节 pH 值至 5.8～6.0。 3.2.2.7 根据不同定量分装，每瓶 30ml～40ml，盖好瓶盖或用封口膜封口， 3.3 灭菌 将分装好的培养基、蒸馏水、接种器械、无菌纸、工作服、口罩、帽子等放入高压蒸汽灭菌锅内， 采用湿热空气灭菌法（灭菌压力0.11 MPa～0.14MPa、温度120℃～126℃、时间15min～20min）进行灭 菌。培养基高压灭菌取出后，置于室温至培养基凝固后即可使用。 4 外植体的选择与处理 4.1 外植体的选择 选择观赏性状好、生长健壮、无病虫害、花期长的优良盆栽红掌品种，并选用带芽茎段为外植体。 4.2 外植体处理 选择生长健壮的带芽茎段，在自来水下冲洗20min。在无菌室内把嫩茎放入75％的酒精中浸泡20s， 用无菌水冲洗一遍，再用10％的次氯酸钠浸泡8min～10min，然后用无菌水冲洗6遍～7遍。 5 接种与培养 5.1 培养条件 光照强度2000Lx,光照时间每天12h，温度25℃±2℃。 5.2 接种 5.2.1 初代培养 在无菌纸上，将带芽茎段切成1cm～2cm小段，转接到初代培养基上诱导：MS+KT2.0mg/L+IBA5mg/L+ 蔗糖30mg/L+琼脂7mg/L。 5.2.2 继代培养 初代培养55d～65d后，可将诱导形成的幼芽转接到MS+6-BA0.2mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂 7g/L增殖培养基上，35d～45d转接1次，继代次数为10次～12次。 5.2.3 生根培养 具有3片～4片叶，高2cm～3cm的无根幼苗转接到生根培养基1/2MS+IBA0.3mg/L+ NAA0.5mg/L+蔗糖 20g/L+琼脂7g/L。 2 DB41/T 769-2012 6 炼苗 6.1 环境消毒 炼苗半月前，用4g～6g/m³硫磺对温室进行熏蒸消毒，用高锰酸钾800～1000倍溶液对工具浸泡30 分钟后，晾干备用。 6.2 环境条件 白天温度以25℃～32℃，夜温以21℃～24℃为宜，最高温度不能高于32℃，最低温度不能低于15℃， 空气湿度为75％～85％，光照以1000lux～4000lux为宜。 6.3 方法 幼苗基部长出3条以上长1.5cm～3cm的新根即可进行炼苗。炼苗时将瓶苗从培养室移到炼苗温室中， 放置7d～10d后，然后打开瓶口放置2d～3d，然后再出瓶。 7 移栽与管理 7.1 环境条件 最适温度为20℃～26℃，最高温度不能高于33℃，最低温度不能低于15℃，空气湿度为75％～85％， 遮光率为50％～60％，光照逐步提高到10000lux。 7.2 基质要求 7.2.1 要求排水透气、保水保肥、不易分解、不含有害物质、能固定植物，主要成分是草炭。 7.2.2 消毒基质符合 GB 4285 标准。用前用 40％甲醛稀释 50 倍液均匀洒于基质上充分搅拌后用薄膜 密封，堆置 5d 后揭开薄膜摊开基质，每日翻动 1 次，让甲醛气体充分发挥，7d 后使用。 7.3 移栽方法 移栽前用镊子小心从瓶中取出苗，放入清水中把琼脂洗净，用800倍～100倍的50％多菌灵药液浸苗 5min后移栽，移栽时用小木棍将穴盘的基质挖个小洞，然后轻轻地把苗放入，再覆上基质将根部盖住。 7.4 管理 7.4.1 幼苗阶段基质含水量 70％～80％，用水符合 GB 17323-1998。 7.4.2 当新根开始生长、新叶出现时进行首次施肥，以后每隔 2～3 周追肥 1 次，施用 N：P:K=20:10:20 的复合肥速溶液态肥。 7.4.3 隔 15d～25d 喷洒杀菌、杀虫剂一次，施用 50％多菌灵 1000 倍或 50％甲维盐 1000 倍。预防为 主综合防治为原则。按照 GB 4285 和中华人民共和国农业部第 199 号（2002）公告规定，优先采用物理 防治、生物防治，科学合理的结合化学防治，农药使用采用合理混用、轮换、交替使用。 8 成苗标准 小苗规格为5cm～14cm，中苗规格为15cm～20cm，大苗规格为21cm～27cm。 3 DB41/T 769-2012 附录 A （资料性附录） MS 培养基母液配制用量表 表 A.1 给出了 MS 培养基母液配制用量。 表 A.1 种类 大量元素 微量元素 配 1L 母液称取量 使用浓度 (mg) (mg/L) 硝酸钾 KNO3 19000 1900 硝酸铵 NH4NO3 16500 1650 磷酸二氢钾 KH2PO4 1700 170 硫酸镁 MgSO4.7H2O 3700 370 氯化钙 CaCl2.2H2O 4400 440 碘化钾 KI 83 0.83 硼酸 H3BO3 620 6.2 硫酸锰 MnSO4.4H2O 2230 22.3 硫酸锌 ZnSO4.7H2O 860 8.6 钼酸钠 Na2MoO4.2H2O 25 0.25 硫酸铜 CuSO4.5H2O 2.5 0.025 氯化钴 CoCl2 2.5 0.025 3730 37.3 成分 配 1L 培养基吸取母液量（ml） 100 10 乙二胺四乙酸二钠 铁盐 有机物 Na2.EDTA.2H2O 10 硫酸亚铁 FeSO4.7H2O 2780 27.8 肌醇 10000 100 甘氨酸 200 2 盐酸硫胺素/VB1 40 0.4 盐酸吡哆醇/VB6 50 0.5 烟酸 VB5 或 VPP 50 0.5 10 4