中华人民共和国国家标准 GB5009.150—2016 食品安全国家标准 食品中红曲色素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.150—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.150—2003《食品中红曲色素的测定》。 本标准与GB/T5009.150—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中红曲色素的测定”; ———增加了高效液相色谱法测定红曲色素,可准确定量; ———扩大了方法的适用范围; ———改进了样品前处理分析方法; ———删除了薄层色谱法。GB5009.150—2016 1 食品安全国家标准 食品中红曲色素的测定 1 范围 本标准规定了食品中红曲红素、红曲素、红曲红胺的测定方法。 本标准适用于风味发酵乳、果酱、腐乳、干杏仁、糖果、方便面制品、糕点、饼干、熟肉制品、酱油、果蔬 菜汁饮料、固体饮料、配制酒、果冻、薯片中3种红曲色素的测定。 2 原理 试样用无水乙醇或80%乙醇提取后,经固相萃取柱净化,采用液相色谱检测,以保留时间定性,外 标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.2 无水乙醇(CH3CH2OH):色谱纯。 3.1.3 冰乙酸(CH3COOH)。 3.1.4 乙酸铵(CH3COONH4)。 3.2 试剂配制 3.2.1 乙酸-乙酸铵溶液(pH=5):准确称取0.77g乙酸铵置于1L容量瓶内,加900mL水溶解,用冰 乙酸调节pH=5.0,加水定容至1L,混匀,经0.45μm微孔滤膜过滤后使用。 3.2.2 甲醇溶液(20%):量取甲醇20mL,加水稀释并定容至100mL,混匀。 3.2.3 甲醇溶液(40%):量取甲醇40mL,加水稀释并定容至100mL,混匀。 3.2.4 乙醇溶液(80%):量取乙醇800mL,加水稀释并定容至1L,混匀。 3.3 标准品 3.3.1 红曲红素标准品(C23H26O5,CAS号:874807-57-5),纯度≥99.0%。 3.3.2 红曲素标准品(C21H26O5,CAS号:21516-68-7),纯度≥97.0%。 3.3.3 红曲红胺标准品(C23H27NO4,CAS号:126631-93-4),纯度≥99.0%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 红曲红素、红曲素、红曲红胺混合标准储备溶液:分别准确(精确至0.01mg)称取红曲红素 0.25g、红曲素2.5mg、红曲红胺5.0mg于50mL小烧杯中,加甲醇溶解,用甲醇转移到50mL容量瓶GB5009.150—2016 2 中,定容,混匀,于4℃保存,其中红曲红素质量浓度为5000μg/mL、红曲素为50μg/mL、红曲红胺为 100μg/mL。 3.4.2 红曲红素、红曲素、红曲红胺混合标准曲线工作液:分别吸取混合标准储备溶液0.50mL、 1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL于25mL容量瓶中,用甲醇溶液定容至刻度,混匀,于4℃保存。 3.5 材料 N-乙烯吡咯烷酮和二乙烯基苯聚合物:200mg,6mL。使用前依次用5mL甲醇、5mL水活化。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪,配置紫外可见检测器。 4.2 分析天平:感量为0.01mg和0.01g。 4.3 离心机:转速≥4000r/min。 4.4 高速均质器。 4.5 高速粉碎机。 4.6 固相萃取装置。 4.7 有机相型微孔滤膜:孔径0.45μm。 5 分析步骤 5.1 试样制备及保存 5.1.1 液体样品 将果汁及果汁饮料、果味碳酸饮料等样品摇匀分装,密闭常温或冷藏保存。 5.1.2 半固态样品 对果冻、风味发酵乳等样品取可食部分匀浆后,搅拌均匀,分装,密闭冷藏或冷冻保存。 5.1.3 固体样品 饼干、糕点、熟肉制品等低含水量样品,经高速粉碎机粉碎、分装,于室温下避光密闭保存;对于固体 饮料等呈均匀状的粉状样品,可直接分装,于室温下避光密闭保存。 5.2 试样处理 5.2.1 液体样品 称取5g(精确至0.01g)均匀试样(若试样中含二氧化碳应先加热除去)置于烧杯中,用适量无水乙 醇溶解并转移至50mL容量瓶中,加无水乙醇定容,摇匀。准确移取上述提取液20mL于100mL鸡 心瓶中,向鸡心瓶中加入10mL无水乙醇,在60℃±2℃下旋转浓缩至近干,用2mL20%甲醇溶液洗 涤鸡心瓶2次。 将上述待提取液全部转移至经过预活化的HLB固相萃取柱中,控制流速在1mL/min~ 2mL/min,弃去流出液。用5mL40%甲醇溶液淋洗净化柱,弃去流出液,再用5mL甲醇洗脱,控制流 速在1mL/min~2mL/min,收集洗脱液于25mL刻度离心管中,洗脱液在45℃下氮吹干后,用2mL 40%甲醇溶液振荡溶解残渣后过0.45μm有机滤膜,待测。