中华人民共和国国家标准 GB5009.206—2016 食品安全国家标准 水产品中河豚毒素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.206—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T23217—2008《水产品中河豚毒素的测定 液相色谱-荧光检测法》、GB/T5009.206— 2007《鲜河豚鱼中河豚毒素的测定》和SN/T1569.2—2013《出口河豚鱼中河豚毒素检测方法 第2部 分:小鼠生物法》。 本标准与GB/T5009.206—2007相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 水产品中河豚毒素的测定”; ———增加了净化步骤; ———修改了酶联免疫吸附法。GB5009.206—2016 1 食品安全国家标准 水产品中河豚毒素的测定 1 范围 本标准规定了水产品中河豚毒素的测定方法。 本标准第一法适用于河豚鱼肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。第二法适用于河豚鱼 肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。第三法适用于河豚鱼、织纹螺、虾、牡蛎、花蛤和鱿鱼中 河豚毒素的测定。第四法适用于河豚鱼肌肉、肝脏、皮肤和性腺组织中河豚毒素的测定。 第一法 小鼠生物法 2 原理 根据河豚毒素易溶于酸性溶液原理,试样制备后经两次乙酸溶液(0.5%)煮沸提取,20000g离心 收集上清液,将两次上清液合并定容至25mL,用于小鼠生物试验。根据小鼠注射试样提取液后的死亡 时间,查出鼠单位,并按小鼠体重校正鼠单位,计算确定河豚毒素含量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,实验用水为GB6682规定的三级水。 3.1 试剂 3.1.1 冰乙酸(CH3COOH)。 3.1.2 氢氧化钠(NaOH)。 3.2 试剂配制 3.2.1 乙酸溶液(0.5%):将5mL冰乙酸用水稀释至1L。 3.2.2 氢氧化钠溶液(1mol/L):将40g氢氧化钠用水溶解并定容至1000mL。 3.3 标准品 河豚毒素(C11H17N3O8,CAS号:4368-28-9),纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标 准物质。 3.4 实验动物 小白鼠:体重19.0g~21.0g,无特定病原体级(SPF)昆明系雄性健康小鼠。 4 仪器和设备 4.1 均质器:≥12000r/min。GB5009.206—2016 2 4.2 电子天平:感量0.1g。 4.3 离心机:离心力≥30000g。 4.4 秒表。 5 分析步骤 注:为避免毒素的危害,应戴手套进行检验操作。移液器吸头等用过的器材、废弃的提取液等应在氢氧化钠溶液 (1mol/L)中浸泡1h以上,以使毒素分解。 5.1 试样制备 5.1.1 冷冻河豚鱼样品 将样品装于密封塑料袋内于自来水水流下快速解冻。解冻后用水洗净,用滤纸吸干,分解成肌肉、 肝脏、皮肤等部分。分别称量后将各组织剪碎,充分均质。 5.1.2 新鲜河豚鱼样品 将样品用水洗净后用滤纸吸干,分解成肌肉、肝脏、皮肤等部分,分别称量后将各组织剪碎,充分 均质。 5.2 试样提取 5.2.1 肌肉组织试样 准确称取试样10g(精确至0.1g)于50mL离心管中,加入乙酸溶液(0.5%)11mL,充分混匀,沸 水浴中煮沸10min,不断搅拌以防止组织结块。冷却至室温,20000g高速离心20min,移取上清液于 25mL容量瓶中。向沉淀中加入乙酸溶液(0.5%)11mL,充分混匀,沸水浴中煮沸5min,不断搅拌以防 止组织结块。冷却至室温,20000g高速离心20min,移取上清液。合并上清液,混匀,用乙酸溶液 (0.5%)定容至25mL。此提取液1mL相当于0.4g试样。 5.2.2 肝脏组织试样 准确称取10g(精确至0.1g)试样于50mL离心管中,加入乙酸溶液(0.5%)8mL,充分混匀,室温 下20000g高速离心20min,移取上清液于25mL容量瓶中。用8mL乙酸溶液(0.5%)重复提取 1次。合并上清液,混匀,用乙酸溶液(0.5%)定容至25mL。此提取液1mL相当于0.4g试样。 5.2.3 皮肤组织试样 准确称取10g(精确至0.1g)试样于50mL离心管中,加入乙酸溶液(0.5%)11mL,充分混匀,室 温下20000g高速离心20min,移取上清液于25mL容量瓶中。用11mL乙酸溶液(0.5%)重复提取 1次。合并上清液,用乙酸溶液(0.5%)定容至25mL。此提取液1mL相当于0.4g试样。 注1:试样制备时,冷冻样品需在半解冻状态下进行操作。试样若不能及时检验,应于4℃保存,在24h内检验。 注2:如果河豚鱼样品的脏器或者组织不足10g的情况下,按照以上方法进行提取操作,需适量减少乙酸溶液 (0.5%)的加入量。 注3:提取液中应不含有离心分离液表面上被分离出来的油状物、胶状物或者脂质类。 5.3 小鼠试验 选取19.0g~21.0g的无特定病原体级(SPF)昆明系雄性健康小鼠6只,称量并记录体重。随机分