书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ 　 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １９５４２ — ２００７ 代替 ＧＢ ／ Ｔ１９５４２ — ２００４ 饲料中磺胺类药物的测定 高效液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狊狌犾犳狅狀犪犿犻犱犲狊犻狀犳犲犲犱狊 — 犎犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２００７  ０６  ２１ 发布 ２００７  ０９  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准是 ＧＢ ／ Ｔ１９５４２ — ２００４ 《 饲料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的测定 　 高效液相色谱 法 》 的修订版 。 本标准与 ＧＢ ／ Ｔ１９５４２ — ２００４ 主要差异如下 ： ——— 补充了磺胺嘧啶 、 磺胺喹恶啉 、 磺胺甲恶唑三种磺胺药物的测定 ； ——— 增加了净化步骤 。 本标准自实施之日起代替 ＧＢ ／ Ｔ１９５４２ — ２００４ 。 本标准由中华人民共和国农业部提出 。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口 。 本标准起草单位 ： 国家饲料质量监督检验中心 （ 北京 ）。 本标准主要起草人 ： 李兰 、 杨曙明 、 索德成 、 田河山 、 范理 、 赵根龙 。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１９５４２ — ２００４ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １９５４２ — ２００７ 饲料中磺胺类药物的测定 高效液相色谱法 １ 　 范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中磺胺类药物 ： 磺胺嘧啶 、 磺胺二甲基嘧啶 、 磺胺间甲氧 嘧啶 、 磺胺甲恶唑 、 磺胺喹恶啉含量的方法 。 本标准适用于配合饲料 、 浓缩饲料 、 添加剂预混合饲料中磺胺类药物的测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＧＢ ／ Ｔ１４６９９．１ 　 饲料 　 采样 ３ 　 原理 试样中磺胺类药物经乙腈振荡提取后 ， 用碱性氧化铝小柱净化 ， 注入高效液相色谱仪反相色谱系统 中进行分离 ， 用紫外检测器或二极管矩阵检测器检测 ， 外标法计算磺胺类药物的含量 。 注 ： 该方法最低定量限分别为 ： 磺胺嘧啶 、 磺胺间甲氧嘧啶 ５ｍｇ ／ ｋｇ ； 磺胺二甲基嘧啶 、 磺胺甲恶唑 、 磺胺喹恶啉 ２ｍｇ ／ ｋｇ 。 ４ 　 试剂和溶液 除非另有规定 ， 在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的三级用水 。 ４ ． １ 　 冰乙酸 ： 优级纯 。 ４ ． ２ 　 乙腈 ： 色谱纯 。 ４ ． ３ 　 乙腈 ： 分析纯 。 ４ ． ４ 　 甲醇 ： 色谱纯 。 ４ ． ５ 　 流动相 ： 在 １０００ｍＬ 容量瓶中加入 ７５０ｍＬ 去离子水 ， 移取冰乙酸 （ ４．１ ） ３ｍＬ 加入水中 ， 与 ２５０ｍＬ 乙腈 （ ４．２ ） 混合 、 摇匀 ， 过 ０．４５ μ ｍ 滤膜 ， 脱气 ， 备用 。 ４ ． ６ 　 磺胺嘧啶标准品 ： 纯度应大于 ９７％ 。 ４ ． ７ 　 磺胺二甲基嘧啶标准品 ： 纯度应大于 ９７％ 。 ４ ． ８ 　 磺胺间甲氧嘧啶标准品 ： 纯度应大于 ９７％ 。 ４ ． ９ 　 磺胺甲恶唑标准品 ： 纯度应大于 ９７％ 。 ４ ． １０ 　 磺胺喹恶啉标准品 ： 纯度应大于 ９７％ 。 ４ ． １１ 　 磺胺嘧啶标准溶液 ４ ． １１ ． １ 　 磺胺嘧啶标准贮备液 ： 准确称取已知纯度的磺胺嘧啶标准品 １００ｍｇ ， 精确至 ０．０００１ｇ ， 置于 １００ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 加乙腈 （ ４．２ ） 超声使之完全溶解 ， 并定容至刻度 ， 摇匀 ， 该溶液中磺胺嘧啶浓度为 １ｍｇ ／ ｍＬ ， 于 －１６℃ 保存可使用 ６ 个月 。 ４ ． １１ ． ２ 　 磺胺嘧啶标准中间液 ： 准确移取磺胺嘧啶标准贮备液 （ ４．１１．１ ） ５ｍＬ 于 ５０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用乙腈 （ ４．２ ） 定容至刻度 ， 该溶液中磺胺嘧啶浓度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ ， 于 ４℃ 保存可使用 １ 个月 。 １ 犌犅 ／ 犜 １９５４２ — ２００７ ４ ． １１ ． ３ 　 磺胺嘧啶标准工作液 ： 准确移取磺胺嘧啶标准中间液 （ ４．１１．２ ） ５ｍＬ 于 ５０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用流动相 （ ４．５ ） 定容至刻度 ， 该溶液中磺胺嘧啶浓度为 １０ μ ｇ ／ ｍＬ ， 当日使用 。 ４ ． １２ 　 磺胺二甲基嘧啶标准溶液 ： 配制过程同磺胺嘧啶 。 ４ ． １３ 　 磺胺间甲氧嘧啶标准溶液 ： 配制过程同磺胺嘧啶 。 ４ ． １４ 　 磺胺甲恶唑标准溶液 ： 配制过程同磺胺嘧啶 。 ４ ． １５ 　 磺胺喹恶啉标准溶液 ４ ． １５ ． １ 　 磺胺喹恶啉标准贮备液 ： 准确称取已知纯度的磺胺喹恶啉标准品 １００ｍｇ ， 精确至 ０．０００１ｇ ， 置于 １００ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 加甲醇 （ ４．４ ） 超声使之完全溶解 ， 并定容至刻度 ， 摇匀 ， 该溶液中磺胺喹恶 啉浓度为 １ｍｇ ／ ｍＬ ， 于 －１６℃ 保存可使用 ６ 个月 。 ４ ． １５ ． ２ 　 磺胺喹恶啉标准中间液 ： 准确移取磺胺喹恶啉标准贮备液 （ ４．１５．１ ） ５ｍＬ 于 ５０ｍＬ 棕色容量 瓶中 ， 用乙腈 （ ４．２ ） 定容至刻度 ， 该溶液中磺胺喹恶啉浓度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ ， 于 ４℃ 保存可使用 １ 个月 。 ４ ． １５ ． ３ 　 磺胺喹恶啉标准工作液 ： 准确移取磺胺喹恶啉标准中间液 （ ４．１５．２ ） ５ｍＬ 于 ５０ｍＬ 棕色容量 瓶中 ， 用流动相 （ ４．５ ） 定容至刻度 ， 该溶液中磺胺喹恶啉浓度为 １０ μ ｇ ／ ｍＬ ， 当日使用 。 注 ： 若单独测定各组分 ， 也可配制标准工作液使测定组分的浓度在 ２０ｎｇ ～ １００ｎｇ 之间 。 ４ ． １６ 　 磺胺类药物混合标准工作液 分别移取磺胺类药物标准中间液各 ５ｍＬ 于 ５０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用流动相 （ ４．５ ） 定容至刻度 ， 该 溶液中磺胺药物的浓度均为 １０ μ ｇ ／ ｍＬ ， 当日使用 。 注 ： 若同时测定可配制混合标准工作液 。 ５ 　 仪器 ５ ． １ 　 实验室常用仪器设备 。 ５ ． ２ 　 具塞锥形瓶 ： １５０ｍＬ 。 ５ ． ３ 　 振荡器 。 ５ ． ４ 　 高效液相色谱仪 ： 紫外检测器或二极管矩阵检测器 。 ５ ． ５ 　 针头过滤器 ： 备孔径为 ０．４５ μ ｍ 有机微孔滤膜 。 ５ ． ６ 　 碱性氧化铝 ＳＰＥ 小柱 ： １０００ｍｇ ／ １２ｍＬ 、 １２０? 。 ６ 　 试样的选取和制备 ６ ． １ 　 按 ＧＢ ／ Ｔ１４６９９．１ 采样 。 ６ ． ２ 　 选取有代表性饲料样品至少 ５００ｇ ， 四分法缩减至 １００ｇ ， 磨碎 ， 全部通过 ４０ 目筛 ， 混匀 ， 装入密闭 容器中 ， 避光低温保存 ， 备用 。 ７ 　 分析步骤 ７ ． １ 　 试液的制备 ７ ． １ ． １ 　 提取 称取配合饲料 、 浓缩饲料 、 添加剂预混合饲料样品 ２ｇ （ 精确至 ０．００１ｇ ）， 置于具塞锥形瓶 （ ５．２ ） 中 ， 加入 ５０ｍＬ 的乙腈 （ ４．３ ）， 于振荡器 （ ５．３ ） 振荡提取 ３０ｍｉｎ ， 过滤 ， 滤液备用 。 ７ ． １ ． ２ 　 净化 准确吸取试液 （ ７．１．１ ）： 配合饲料 １０ｍＬ ～ ２０ｍＬ ； 浓缩饲料 、 添加剂预混合饲料 ２ｍＬ ， 移入用 １０ｍＬ 乙腈淋洗过的碱性氧化铝小柱 （ ５．５ ） 中 ， 令其自然流速流出 。 待试液 （ ７．１．１ ） 全部流出后 ， 吹干 ， 用两次 ２ｍＬ 流动相 （ ４．５ ） 洗脱 ， 收集洗脱液 ， 并过 ０．４５ μ ｍ 的滤膜 ， 滤液上机测定 。 ７ ． ２ 　 色谱条件 ７ ． ２ ． １ 　 色谱柱 ： 具有 Ｃ １８ 填料的柱子 （ 粒度为 ５ μ ｍ ）， 柱长 ２５０ｍｍ ， 内径 ４．６ｍｍ 。 ２ 犌犅 ／ 犜 １９５４２ — ２００７ ７ ． ２ ． ２ 　 流动相 ： ２５％ 乙腈水 （ ４．５ ）， 以 １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ 流速洗脱 。 ７ ． ２ ． ３ 　 进样量 ： ２０ μ Ｌ 。 ７ ． ２ ． ４ 　 检测器 ： 紫外检测器或二极管矩阵检测器 ， 检测波长 ２７０ｎｍ 。 若单独测定磺胺嘧啶检测波长为 ２６８ｎｍ ； 磺胺二甲基嘧啶检测波长为 ２６６ｎｍ ； 磺胺间甲氧嘧啶检测波长为 ２７１ｎｍ ； 磺胺甲恶唑检测波 长为 ２６８ｎｍ ； 磺胺喹恶啉检测波长为 ２４６ｎｍ 。 ８ 　 定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数 。 向液相色谱柱中注入待测定磺胺标准工作液或混合 标准工作液 （ ４．１６ ） 及试样溶液 （ ７．１ ）， 得到色谱峰面积响应值 ， 用外标法定量 。 ９ 　 结果计算 ９ ． １ 　 试样中每种磺胺的含量分别按式 （ １ ） 计算 ： 狑 ｉ ＝ 犘 ｉ × 犞 × 犮 ｉ × 犞 ｓｔ 犘 ｓｔｉ × 犿