书 书 书犐犆犛 ６５ ． １６０ 犡 ８７ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２３２２８ — ２００８ 卷烟 　 主流烟气总粒相物中 烟草特有 犖  亚硝胺的测定 气相色谱  热能分析联用法 犆犻犵犪狉犲狋狋犲 — 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狋狅犫犪犮犮狅狊狆犲犮犻犳犻犮 犖 犖犻狋狉狅狊犪犿犻狀犲狊 犻狀狋狅狋犪犾狆犪狉狋犻犮狌犾犪狋犲犿犪狋狋犲狉狅犳犿犪犻狀狊狋狉犲犪犿犮犻犵犪狉犲狋狋犲狊犿狅犽犲 — 犌犆犜犈犃犿犲狋犺狅犱 ２００８  １２  ３１ 发布 ２００９  ０６  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 为资料性附录 。 本标准由国家烟草专卖局提出 。 本标准由全国烟草标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ１４４ ） 归口 。 本标准起草单位 ： 中国烟草总公司郑州烟草研究院 、 上海烟草 （ 集团 ） 公司 。 本标准主要起草人 ： 谢复炜 、 金永明 、 赵明月 、 王 癉 、 刘克建 、 吴鸣 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２３２２８ — ２００８ 卷烟 　 主流烟气总粒相物中 烟草特有 犖  亚硝胺的测定 气相色谱  热能分析联用法 １ 　 范围 本标准规定了卷烟主流烟气总粒相物中 犖  亚硝基降烟碱 （ ＮＮＮ ）、 犖  亚硝基新烟碱 （ ＮＡＴ ）、 犖  亚 硝基假木贼碱 （ ＮＡＢ ） 和 ４ （ 甲基亚硝胺基 ） １ （ ３ 吡啶基 ） １ 丁酮 （ ＮＮＫ ） 四种烟草特有亚硝胺的测定 方法 。 本标准适用于卷烟烟气总粒相物中以上四种烟草特有亚硝胺的测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ５６０６．１ 　 卷烟 　 第 １ 部分 ： 抽样 ＧＢ ／ Ｔ１９６０９ 　 卷烟 　 用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油 （ ＧＢ ／ Ｔ１９６０９ — ２００４ ， ＩＳＯ４３８７ ： ２０００ ， ＭＯＤ ） ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 。 ３ ． １ 烟草特有亚硝胺 　 狋狅犫犪犮犮狅狊狆犲犮犻犳犻犮狀犻狋狉狅狊犪犿犻狀犲狊 （ 犜犛犖犃狊 ） 仅在烟草及烟草制品中存在的 犖  亚硝胺 。 ４ 　 原理 用玻璃纤维滤片捕集卷烟主流烟气中的总粒相物 ， 用二氯甲烷萃取粒相物中的 ＴＳＮＡｓ ， 浓缩萃取 物并采用碱性氧化铝层析柱进行纯化 。 通过气相色谱  热能分析联用仪 （ ＧＣＴＥＡ ） 检测萃取物中亚硝 胺的浓度 ， 对主流烟气总粒相物中 ＴＳＮＡｓ 进行定量分析 。 ５ 　 试剂与材料 除特别要求以外 ， 均应使用分析纯级试剂 。 水应为蒸馏水或同等纯度的水 。 ５ ． １ 　 二氯甲烷 ， 色谱纯 （ 或分析纯经重蒸后使用 ）。 ５ ． ２ 　 甲醇 ， 色谱纯 （ 或分析纯经重蒸后使用 ）。 ５ ． ３ 　 无水硫酸钠 。 ５ ． ４ 　 碱性氧化铝 ， ２００ 目 ～ ３００ 目 。 ５ ． ５ 　 犖  戊基  （ ３ 甲基吡啶基 ） 亚硝胺 、 ＮＮＮ 、 ＮＡＴ 、 ＮＡＢ 、 ＮＮＫ ， 纯度应大于 ９７％ 。 ５ ． ６ 　 内标溶液 ５ ． ６ ． １ 　 内标储备液 准确称量 １０ｍｇ 犖  戊基  （ ３ 甲基吡啶基 ） 亚硝胺 ， 加入约 ５０ｍＬ 二氯甲烷 （ ５．１ ） 完全溶解后 ， 转移 １ 犌犅 ／ 犜 ２３２２８ — ２００８ 至 １００ｍＬ 的棕色容量瓶中 ， 用二氯甲烷 （ ５．１ ） 定容至刻度 。 该内标储备液在 －２０℃ 冰箱内存放 ， 有效 期为 ６ 个月 。 ５ ． ６ ． ２ 　 一级内标溶液 准确移取 ２ｍＬ 内标储备液 （ ５．６．１ ） 至 ５０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用二氯甲烷 （ ５．１ ） 定容至刻度 。 该一 级内标溶液在 －２０℃ 冰箱内存放 ， 有效期为 ６ 个月 。 ５ ． ６ ． ３ 　 二级内标溶液 准确移取 １０ｍＬ 一级内标溶液 （ ５．６．２ ） 至 １００ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用二氯甲烷 （ ５．１ ） 定容至刻度 。 该二级内标溶液在 －２０℃ 冰箱内存放 ， 有效期为 ３ 个月 。 ５ ． ７ 　 ＴＳＮＡｓ 标准溶液 ５ ． ７ ． １ 　 标准储备液 分别准确称量 １０ｍｇＮＮＮ 、 ＮＡＴ 、 ＮＡＢ 和 ＮＮＫ ， 加入约 ５ｍＬ 二氯甲烷 （ ５．１ ） 完全溶解后 ， 转移至 １０ｍＬ 的棕色容量瓶中 ， 用二氯甲烷 （ ５．１ ） 定容至刻度 。 该标准储备液在 －２０℃ 冰箱内存放 ， 有效期为 ６ 个月 。 ５ ． ７ ． ２ 　 一级标准溶液 准确移取 １ｍＬ 标准储备液 （ ５．７．１ ） 至 １００ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用二氯甲烷 （ ５．１ ） 定容至刻度 。 该一 级标准溶液在 －２０℃ 冰箱内存放 ， 有效期为 ６ 个月 。 ５ ． ７ ． ３ 　 二级标准溶液 准确移取 １ｍＬ 一级标准溶液 （ ５．７．２ ） 至 １０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用二氯甲烷 （ ５．１ ） 定容至刻度 。 该 二级标准溶液在 －２０℃ 冰箱内存放 ， 有效期为 ３ 个月 。 ５ ． ８ 　 ＴＳＮＡｓ 校准溶液 ： 分别准确移取 ０．５ｍＬ 、 １ｍＬ 、 ２ｍＬ 、 ５ｍＬ 二级标准溶液 （ ５．７．３ ） 和 １ｍＬ 、 ２ｍＬ 一级标准溶液 （ ５．７．２ ） 至 １０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 准确加入 １ｍＬ 一级内标溶液 （ ５．６．２ ）， 最后用二氯甲烷 （ ５．１ ） 定容至刻度 ， 此六个标准溶液为系列标准校准溶液 。 该 ＴＳＮＡｓ 校准溶液应在使用前配制 。 　　 注 ： 烟草特有亚硝胺是强烈致癌物质 。 所有前处理操作应在通风橱内进行 ， 实验人员应佩带防护手套 、 面具以保证 安全 。 实验废液收集后应统一处理 。 ６ 　 仪器设备 常用实验仪器以及下述各项 。 ６ ． １ 　 分析天平 ， 精确至 ０．１ｍｇ 。 ６ ． ２ 　 气相色谱  热能分析联用仪 。 ６ ． ３ 　 超声波发生器 。 ６ ． ４ 　 旋转蒸发仪 。 ６ ． ５ 　 色谱柱 ， 弹性毛细管柱 ３０ｍ×０．５３ｍｍ×１ μ ｍ ， 建议固定液 ： ＨＰ－５０＋ 。 ６ ． ６ 　 保护柱 ， 弹性石英毛细管柱 １ｍ×０．５３ｍｍ ， 应经脱活处理 。 ６ ． ７ 　 玻璃层析柱 ， 具塞 ， 内径为 ２０ｍｍ ， 长度为 ３００ｍｍ 。 ７ 　 抽样 按照 ＧＢ ／ Ｔ５６０６．１ 的规定抽取实验室样品 。 ８ 　 分析步骤 ８ ． １ 　 卷烟的抽吸 按照 ＧＢ ／ Ｔ１９６０９ 的规定收集 ２０ 支卷烟的粒相物 。 ８ ． ２ 　 测定次数 每个样品应平行测定两次 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２３２２８ — ２００８ ８ ． ３ 　 样品分析 ８ ． ３ ． １ 　 样品萃取 将捕集有主流烟气粒相物的滤片放入 ２５０ｍＬ 锥形瓶中 ， 置于超声波发生器 （ ６．３ ） 内 ， 用二氯甲烷 （ ５．１ ） 分三次超声波萃取 ， 每次 １０ｍｉｎ ， 第一次使用 １００ｍＬ 二氯甲烷 ， 其余两次各使用 ８０ｍＬ 二氯甲 烷 。 将所有萃取液经无水硫酸钠 （ ５．３ ） 过滤 ， 转移至 ５００ｍＬ 磨口圆底烧瓶中 。 ８ ． ３ ． ２ 　 萃取液浓缩 将盛有萃取液的圆底烧瓶连接旋转蒸发仪 （ ６．４ ）， 通高纯氮气旋转蒸发 （ ４０℃ 水浴 ）， 浓缩至 ５ｍＬ 。 ８ ． ３ ． ３ 　 样品净化 ８ ． ３ ． ３ ． １ 　 层析柱的准备 碱性氧化铝 （ ５．４ ） 在 １１０℃ 下活化 ２ｈ 。 玻璃层析柱 （ ６．７ ） 应保持洁净干燥 ， 先加入 ３０ｍＬ 二氯甲 烷 （ ５．１ ）， 再用湿法将 １５ｇ 碱性氧化铝 （ ５．４ ） 加到层析柱中 ， 充分搅拌并赶走所有气泡 。 用 ５０ｍＬ 二氯 甲烷淋洗层析柱 。 ８ ． ３ ． ３ ． ２ 　 层析 将浓缩后样品 （ ８．３．２ ） 一次性加入按照 ８．３．３．１ 准备的层析柱中 ， 并用二氯甲烷 （ ５．１ ） 分三次洗涤 烧瓶壁 ， 每次 ５ｍＬ 。 用 ３０ｍＬ 二氯甲烷淋洗层析柱 ， 流速应控制在约 ２ｍＬ ／ ｍｉｎ ， 不收集洗脱液 。 用 １００ｍＬ８％ 甲醇  二氯甲烷 （ 体积分数 ） 溶液淋洗层析柱 ， 收集此部分洗脱液 。 ８ ． ３ ． ４ 　 洗脱液浓缩 在洗脱液中加入 １ｍＬ 二级内标溶液 （ ５．６．３ ） 后 ， 通高纯氮气浓缩至 ３０ｍＬ ， 转移至 ５０ｍＬ 梨形烧 瓶中 ， 浓缩至约 １ｍＬ 后 ， 移至 ２ｍＬ 色谱分析瓶中待分析 。 ８ ． ４ 　 分析 按照制造商操作手册运行气相色谱  热能分析联用仪 。 以下分析条件可供参考 ， 采用其他条件应验 证其适用性 。 ——— 程序升温 ： 初始温度 １５０℃ ， 保持 ２ｍｉｎ ； 以 ３℃ ／ ｍｉｎ 速率升至 ２３０℃ ， ２０℃ ／ ｍｉｎ 速率升至 ２６０℃ ， 保持 ２０ｍｉｎ ； ——— 进样口温度 ： ２３０℃ ； ——— 载气 ： 氦气 ， 恒流 １０ｍＬ