ICS67.200.10 CCSX04 中华人民共和国国家标准 GB/T46666—2025 粮油检验 植物油中角鲨烯的测定 气相色谱法 Inspectionofgrainandoils—Determinationofsqualeneinvegetableoils— Gaschromatographicmethod 2025-10-31发布 2026-05-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由国家粮食和物资储备局提出。 本文件由全国粮油标准化技术委员会(SAC/TC270)归口。 本文件起草单位:国家粮食和物资储备局科学研究院、赣州市综合检验检测院、佳格食品(中国)有 限公司、北京市营养源研究所有限公司、中国检验认证集团山东检测有限公司、山东省粮油检测中心、 中储粮镇江质检中心有限公司、广西壮族自治区粮油质量检验中心、江西省检验检测认证总院食品检验 检测研究院。 本文件主要起草人:朱琳、张蕊、王松山、郭宝元、薛雅琳、刘贤标、吴祥骞、张冰、崔亚娟、王鹏功、 董斌、张颖霞、农子明、彭志兵、陈园、张东生。 ⅠGB/T46666—2025 粮油检验 植物油中角鲨烯的测定 气相色谱法 1 范围 本文件描述了植物油中角鲨烯含量测定的气相色谱法。 本文件适用于植物油中角鲨烯含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T15687 动植物油脂 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 样品经氢氧化钾-乙醇溶液皂化,正己烷萃取角鲨烯后,采用气相色谱法,以角鲨烷为内标测定样品 中角鲨烯的含量。 5 试剂和材料 除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 5.1 正己烷(C6H14):色谱纯。 5.2 氢氧化钾-乙醇溶液(约1mol/L):称取60g±0.1g氢氧化钾,溶于50mL水中,冷却至室温后,加 入950mL95%(体积分数)乙醇,搅拌均匀,转移至具胶塞的试剂瓶中,溶液应为无色或浅黄色。 5.3 10%乙醇溶液:用量筒量取50mL无水乙醇于500mL容量瓶中,用水定容至刻度。 5.4 无水硫酸钠(Na2SO4)。 5.5 角鲨烷标准品(C30H62,CAS号:111-01-3):纯度≥98%,或具有证书的标准样品/标准物质。 5.6 角鲨烯标准品(C30H50,CAS号:111-02-4):纯度≥98%,或具有证书的标准样品/标准物质。 5.7 角鲨烷内标溶液:准确称取25mg(精确至0.0001g)角鲨烷标准品(5.5)于25mL容量瓶中,加入 少量正己烷(5.1),使其充分溶解后,用正己烷(5.1)定容至刻度,摇匀,即配成1mg/mL角鲨烷内标溶 液。在-20℃密封避光保存,有效期3个月。临用前需缓至室温。 5.8 角鲨烯标准溶液:准确称取10mg(精确到0.0001g)角鲨烯标准品(5.6)于50mL容量瓶中,加入 少量正己烷(5.1),使其充分溶解后,用正己烷(5.1)定容至刻度,摇匀,即配成200μg/mL的角鲨烯标准 溶液。在-20℃密封避光保存,有效期3个月。临用前需缓至室温。 1GB/T46666—2025 5.9 pH试纸:指示范围1~14。 5.10 滤纸:定性,中速。 6 仪器和设备 6.1 圆底烧瓶:带标准磨口的250mL圆底烧瓶。 6.2 回流冷凝管:具有与圆底烧瓶(6.1)配套的磨口。 6.3 250mL分液漏斗:具有聚四氟乙烯旋塞。 6.4 恒温水浴锅:可恒温80℃±2℃。 6.5 涡旋振荡器。 6.6 分析天平:感量0.0001g。 6.7 旋转蒸发仪:配有可恒温40℃±2℃的水浴装置。 6.8 氮吹仪。 6.9 气相色谱仪:配火焰离子化检测器(FID)。 7 试样制备 按GB/T15687执行。 8 操作步骤 8.1 样品前处理 8.1.1 称量 准确吸取300μL角鲨烷内标溶液(5.7)于250mL圆底烧瓶(6.1)中,在氮吹仪(6.8)上吹干后,准 确称取0.2g~2g试样(精确到0.0001g)于烧瓶中。 8.1.2 皂化 向装有试样的烧瓶(见8.1.1)中加入50mL氢氧化钾-乙醇溶液(5.2)后,将烧瓶与回流冷凝管(6.2) 连接好,在80℃恒温水浴锅(6.4)中皂化回流50min,停止加热,从回流管顶部加入50mL水,取出烧 瓶摇匀,冷却至室温。 8.1.3 提取 将烧瓶中的皂化液转移至250mL分液漏斗(6.3)中,用50mL正己烷(5.1)分3次洗涤烧瓶,并将 洗涤液倒入分液漏斗中,用力摇动分液漏斗2min,倒转分液漏斗,并小心打开旋塞,间歇地释放压力 后,静置分层,将下层皂化液转移至另一个250mL分液漏斗中,再用相同的方法,分别用30mL、20mL 正己烷(5.1)对皂化液再提取两次,将3次正己烷提取液合并于同一分液漏斗中。 8.1.4 洗涤 用25mL10%乙醇溶液(5.3)洗涤正己烷提取液3次~4次,每次弃去下层的乙醇水溶液,用pH 试纸(5.9)测试直至下层流出液呈中性。 第一次用10%乙醇溶液洗涤时应轻摇,防止乳化,逐次振摇强度可增加。如出现乳化层,可喷淋少 量的无水乙醇。 2GB/T46666—2025 8.1.5 浓缩 将洗至中性的正己烷提取液经过铺有约5g无水硫酸钠(5.4)的滤纸(5.10)滤入与旋转蒸发仪 (6.7)配套的球形蒸发瓶中,再用约20mL的正己烷(5.1)冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次,并入蒸发瓶 中,在40℃水浴中旋转蒸发溶剂,待瓶中剩下约2mL正己烷时,取下蒸发瓶,立即放入氮吹仪(6.8)中 吹干,用少量正己烷(5.1)涡旋溶解后定容至10mL,待测。 8.2 色谱参考条件 色谱参考条件如下: a) 气相色谱柱:(5%-苯基)-甲基聚硅氧烷作为固定相的毛细管柱,长30m,内径0.32mm,膜厚 0.25μm; b) 载气:高纯氮气,纯度≥99.999%; c) 采用恒压模式,110.3kPa; d) 进样口温度:250℃; e) 分流比:10∶1; f) 柱温:采用程序升温方式,以15℃/min的速率从160℃升温到220℃,保持2min,然后以 5℃/min的速率升温到280℃,保持20min;最后以5℃/min的速率升温到300℃,保持 2min; g) FID检测器:温度300℃,氢气流速40mL/min,空气流速450mL/min,尾吹气(氮气)流速 30mL/min; h) 进样量:1.0μL。 也可采用其他等效的毛细管柱或色谱条件。 8.3 保留时间的确定 分别吸取30μL角鲨烷内标溶液(5.7)和500μL角鲨烯标准溶液(5.8)于进样小瓶中,用正己烷 (5.1)稀释至1mL,涡旋混匀后,注入气相色谱仪中进行分析,以确定角鲨烷内标和角鲨烯标准品的保 留时间。色谱图见附录A中图A.1。 8.4 样品测定 平行做两份试验。 将样品待测液(见8.1.5)注入气相色谱仪中进行分析,记录样品中角鲨烯和内标角鲨烷的峰面积。 根据样品待测液中角鲨烯与内标角鲨烷的峰面积比、内标角鲨烷质量以及角鲨烯与内标角鲨烷的校正 因子,计算出样品待测液中角鲨烯的含量。色谱图见图A.2。 如果样品待测液的角鲨烯峰面积超过角鲨烯标准溶液(5.8)峰面积,则应适当调整待测样品的称样 质量,重新进行测定。 9 试验数据处理 在给定的条件下,用气相色谱FID检测等量的角鲨烯和角鲨烷时可获得相同的响应值,角鲨烯和 角鲨烷的校正因子为1.0。样品中角鲨烯的含量(X)按公式(1)计算: 3GB/T46666—2025 X=A1 AS×mS m×1000 1000…………………………(1) 式中: X ———样品中角鲨烯的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); A1———样品中角鲨烯的峰面积; AS———样品中内标角鲨烷的峰面积; mS———样品中加入的内标角鲨烷的质量,单位为微克(μg); m———样品质量,单位为克(g); 1000———换算系数。 结果保留小数点后一位。 10 精密度 10.1 实验室间比对试验 方法精密度的实验室间比对试验统计结果见附录B,对于其他测试范围来说,这些实验数据可能不 适用。 10.2 重复性 在同一实验室,由同一操作者使用相同设备,按相同的测试方法,并在短时间内对同一被测对象相 互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表1所给的重复性限(r)的情况不超过5%。 表1 角鲨烯测定时的重复性限 单位为毫克每千克 Sr r Sr=0.0111m+4.5832 r=2.8×Sr 注:Sr为重复性标准偏差;m为两次测定值的平均值;r为重复性限。 10.3 再现性 在不同实验室,由不同的操作者使用不同的设备,按相同的测试方法,对同一被测对象相互独立进 行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于表2所给的再现性限(R)的情况不超过5%。 表2 角鲨烯测定时的再现性限 单位为毫克每千克 SR R SR=0.0739m R=2.8×SR 注:SR为再现性标准偏差;m为两次测定值的平均值;R为再现性限。 11 检出限和定量限 当试样称取量为2g,本方法的检出限为5.0mg/kg,定量限为15.0mg/