ICS65.020 CCS B 60 中华人民共和国国家标准 GB/T41716—2022 漆树中主要有效成分含量的测定 高效液相色谱法 Determination of main active ingredient in lacquer trees- Highpreformance liquid chromatography 2023-11-01实施 2022-10-12发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T41716—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由国家林业和草原局提出。 本文件由全国林化产品标准化技术委员会（SAC/TC558）归口。 本文件起草单位：中国林业科学研究院林产化学工业研究所、中国标准化研究院、北京林业大学、南 京林业大学、深圳市标准技术研究院、浙江科技学院、中华全国供销合作总社西安生漆涂料研究所、中山 内得农业科技有限公司。 本文件主要起草人：李文君、王成章、汪咏梅、刘军利、杨中志、周昊、陈虹霞、席兴军、雷建都、 黄超伯、杨志花、刘铁兵、兰韬、李东旭、任红艳、李艳、施珊玲。 1 GB/T41716—2022 漆树中主要有效成分含量的测定 高效液相色谱法 1范围 本文件描述了高效液相色谱法测定漆树中主要有效成分含量的方法。 和漆酚）和黄酮（黄颜木素、漆黄素、硫黄菊素和紫铆花素）化合物单个或多个组分含量的测定 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T6682 2分析实验室用水规格和试验方法 GB/T36055林业生物质原料分析方法含水率的测定 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 饱和漆酚 分saturated urushiol 漆酚分子侧链脂肪烷烃中不含有碳碳双键的漆酚分子化合物。 3.2 单不饱和漆酚 monounsaturated urushiol 漆酚分子侧链脂肪烷烃中具有一个碳碳双键的漆酚分子化合物。 3.3 二不饱和漆酚 diunsaturated urushiol 漆酚分子侧链脂肪烷烃中具有二个碳碳双键的漆酚分子化合物。 3.4 三不饱和漆酚 triunsaturated urushiol 漆酚分子侧链脂肪烷烃中具有三个碳碳双键的漆酚分子化合物。 4原理 在同一个分析周期内，按一定时间程序调节流动相配比，使漆树中主要有效成分按各自适宜的容量 黄素、硫黄菊素和紫铆花素在特定波长下有最大紫外吸收，在其对应波长条件下进行检测，并用标准物 质外标法直接定量分析。 1 GB/T41716—2022 5试剂或材料 本文件所用试剂除特别说明外，皆为分析纯试剂，用水为GB/T6682规定的一级水或同等纯度水； 未指明用何种溶剂配制时，均指水溶液。 5.1甲醇，乙：色谱纯。 5.2三氯甲烷，无水乙醇，醋酸，乙酸乙酯。 5.4漆树黄酮标准物质（纯度≥98%）：黄颜木素、漆黄素、硫黄菊素和紫铆花素。 5.5有机相微孔滤膜：孔径0.22um。 棕色容量瓶中，甲醇溶解、定容、混匀，配制2.00mg/ml的饱和漆酚、单不饱和漆酚、二不饱和漆酚、三 不饱和漆酚标准储备溶液。 5.7漆树黄酮标准储备溶液（2.00mg/mL）：分别准确称取20mg5.4中各黄酮标准物质分置于10ml 棕色容量瓶中，甲醇溶解、定容、混勾，配制2.00mg/mL的黄颜木素、漆黄素、硫黄菊素和紫铆花素标准 储备溶液。 0mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、1.00mg/mL、1.50mg/mL、2.00mg/mL的标准工作溶液，现配 现用。 5.9漆树黄酮标准工作溶液：分别吸取适量的5.7中各漆树黄酮标准储备溶液配制质量浓度为 0mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、1.00mg/mL、1.50mg/mL、2.00mg/mL的标准工作溶液，现配 现用。 6仪器设备 6.1高效液相色谱（HPLC)仪，DAD检测器（波长范围190nm~400nm）。 6.2分析天平：感量0.1mg。 6.3粉碎机：筛板孔径0.180mm。 6.4旋转蒸发仪。 6.5水浴锅。 6.6真空干燥箱。 7样品 7.1样品的制备 的规定测定，用粉碎机将其粉碎后过筛板，得到漆树样品，装人洁净干燥器中，于常温下密闭、干燥保存 备用。 7.2木 样品溶液的制备 7.2.1漆树漆酚样品溶液的制备 称取漆树样品5.0g于250mL圆底烧瓶中，加100mL无水乙醇常温下浸泡3h，过滤，滤液在 2 GB/T41716—2022 3次，收集三氯甲烧层，用旋转蒸发仪减压回收溶剂后，所得漆树漆酚提取物样品浸膏用适量甲醇溶解 并定容于25mL容量瓶中，摇匀后即得漆树漆酚的样品溶液。 7.2.2漆树黄酮样品溶液的制备 称取漆树样品5.0g于250mL圆底烧瓶中，加100mL无水乙醇，80℃（或根据实际大气压设定温 剂，所得提取物先用其10倍质量的乙酸乙酯溶液萃取，然后再用同体积的水进行反向萃取，整个萃取过 程重复3次，收集乙酸乙酯层，用旋转蒸发仪减压回收溶剂后，所得漆树黄酮提取物样品用适量甲醇溶 解并定容于25mL容量瓶中，摇匀后即得漆树黄酮的样品溶液。 8试验步骤 8.1高效液相色谱参考条件 8.1.1漆树漆酚高效液相色谱参考条件 漆树漆酚高效液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱：C1s，250mm×4.6mm（内径），粒径5μum，或柱效相当者； b) 流动相：乙-水（体积比91：9）； c） 流速：0.60mL/min； (P 进样量：5L； e) 检测波长：277nm； 柱温：室温。 8.1.2漆树黄酮高效液相色谱参考条件 漆树黄酮高效液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱：C18，250mm×4.6mm（内径），粒径5um，或柱效相当者； b) 流动相：甲醇（A）-0.5%醋酸水溶液（B），采用梯度洗脱，1min~10min，65%B；10min~ 25min，50%B;25min~50min，25%B;50min~60min,10%B;60min~65min65%B; c） 流速：1.00mL/min； (P 进样量：5=L； e 检测波长：278nm（黄颜木素）、248nm（漆黄素）、257nm（硫黄菊素）和261nm（紫铆花素）； f) 柱温：室温。 8.2标准曲线的制作 8.2.1漆树漆酚标准曲线 分别向高效液相色谱柱中注人质量浓度为0mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、1.00mg/mL、 液，在8.1.1色谱条件下得到相应色谱峰面积，以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线。饱和漆酚、单 附录A中图A.1，其标准样品信息表参见表A.1。 3 GB/T41716—2022 8.2.2漆树黄酮标准曲线 分别向高效液相色谱柱中注入质量浓度为0mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、1.00mg/mL、 1.50mg/mL、2.00mg/mL的黄颜木素、漆黄素、硫黄菊素和紫铆花素的标准工作溶液，在8.1.2色谱条 件下得到相应色谱峰面积，以峰面积对相应浓度绘制标准工作曲线。黄颜木素、漆黄素、硫黄菊素和紫 铆花素的标准样品溶液（2.00mg/mL）的高效液相色谱图参见附录A中图A.2，其标准样品信息表参见 表A.2。 8.3样品溶液的测定 对同一样品平行做两份试验。取待测样品溶液（7.2.1或7.2.2）中的样品溶液，经过0.22m滤膜 过滤后，液相色谱进样，在相应的色谱条件下，以保留时间定性，检测得到相应色谱峰面积，根据相应标 准曲线计算得到样品溶液中饱和漆酚、单不饱和漆酚、二不饱和漆酚、三不饱和漆酚、黄颜木素、漆黄素、 硫黄菊素和紫铆花素的浓度 8.4空自实验 以相同体积的甲醇，采用与8.3中相同的测定步骤进行测定。 9 试验数据处理 紫铆花素含量利用数据处理系统计算或按式（1）计算。 X,=pixV ....(1) mt 式中： X，—样品中漆树饱和漆酚、单不饱和漆酚、二不饱和漆酚、三不饱和漆酚、黄颜木素、漆黄素、紫 铆花素和硫黄菊素的含量，单位为毫克每克（mg/g）； 样品中漆树饱和漆酚、单不饱和漆酚、二不饱和漆酚、三不饱和漆酚、黄颜木素、漆黄素、紫 铆花素和硫黄菊素的质量浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； V--试验样品的定容体积，单位为毫升（mL）； m：—样品的质量，单位为克（g）。 测定结果以平行测定的算术平均值表示，计算结果保留至小数点后两位。 10精密度 在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相 互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。 11注意事项 2.00mg/mL质量浓度的标准工作溶液的吸收峰，则应稀释样品溶液进行测定。另外，液相色谱操作推 荐使用如上参考条件，但可以根据实际情况适当调节以达到最佳分离效果。 4 GB/T41716—2022 12 试验报告 试验报告应包括以下项目： a) 样品信息：试验或测试样品的名称、种类、质量、取样信息等； b) 所使用的标准，包括标准编号、标准名称； c) 所使用的试验方法； (P 试验结果； e) 试验中观察到的异常现象； f) 试验人员、日期。 5 GB/T41716—2022 附录A （资料性） 标准样品溶液的高效液相色谱图 图A.1给出了漆树漆酚标准样品溶液（2.00mg/mL)高效液相色谱图，图A.2给出了