ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T33125—2016 荷兰石竹卷蛾检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofCacoecimorphapronubana(Hübner) 2016-10-13发布 2017-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人:魏晓棠、尼秀媚、吴志毅、朱研研、胡东青、王宇、张宁。 ⅠGB/T33125—2016 荷兰石竹卷蛾检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了荷兰石竹卷蛾Cacoecimorphapronubana(Hübner)的检疫鉴定方法。 本标准适用于荷兰石竹卷蛾的检疫和鉴定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 基斑 basalpatch 鳞翅目昆虫有些种类前翅花斑比较发达,有许多波状纹,横的或斜的,位于翅基部的一块为基斑。 注:鳞翅目前翅花斑中间的一条斜带为中带(medianfascia);靠外缘顶角的一块为端纹(costalpatch);靠前翅外缘 的一条横带为亚外缘横带(subterminalfascia)。 2.2 爪形突 uncus 鳞翅目雄虫背兜后端向下弯曲的片状或钩状结构。 2.3 颚形突 gnathos 鳞翅目雄虫外生殖器中,由背兜后缘发生的一对附器,位于爪形突之下,并可向下向后围绕肛管,在 其下方中央汇合。 2.4 抱器瓣 valvae 鳞翅目雄虫外生殖器两侧成对的由第9腹节演变而来的片状结构。 注:鳞翅目雄虫腹侧边缘的基部区域称为抱器腹(sacculus),背侧边缘区域称为抱器背(costa)。 2.5 阳茎基环 juxta 围绕鳞翅目雄虫阳茎基部的环状骨化构造,与支持阳茎有关。 2.6 囊突 signum 鳞翅目雌虫的交配囊壁内高度骨化的刺状或小钩状构造,一个或数个。 2.7 臀棘 cremaster 鳞翅目昆虫蛹的尾端带钩的刺,起附着作用。 2.8 臀栉 analcomb 鳞翅目幼虫肛上板腹面邻近肛门中间部分骨化的栉形或叉形构造,用以弹去粪粒。 2.9 阴片 sterigma 鳞翅目雌性外生殖器中围绕交配孔周围的骨化结构,其中包括前阴片和后阴片。 1GB/T33125—2016 3 荷兰石竹卷蛾基本信息 中文名:荷兰石竹卷蛾,又名康乃馨卷叶蛾。 学名:CacoecimorphapronubanaHübner。 英文名:Mediterraneancarnationleafroller。 异名:TortrixpronubanaHübner,CacoecimorphaambustanaHübner,CacoecimorphahermineanaDu- ponchel,CacoecimorphainsolatanaLucas,CacoeciapronubanaHübner。 分类地位:属鳞翅目Lepidoptera,卷蛾科Tortricidae,黄卷蛾族Archipini,石竹卷蛾属Cacoecimor- pha。 荷兰石竹卷蛾以幼虫取食寄主植物的芽、叶及花造成为害,主要以幼虫随寄主植物运输而进行远距 离传播,其寄主、地理分布和生物学特性参见附录A。 石竹卷蛾属中仅荷兰石竹卷蛾一个种,该属与黄卷蛾族中其他属的区分特征参见附录B。 4 方法原理 根据荷兰石竹卷蛾寄主、生物学特性和形态特征进行种类鉴定。如果现场检疫发现低龄幼虫,需要 饲养至老熟幼虫或成虫,利用体视显微镜进行观察鉴定。如果利用外部形态特征判定其种类仍有疑问 时,需进一步解剖雌雄成虫外生殖器并制成玻片标本,在生物显微镜下观察。 5 仪器、用具和试剂 5.1 仪器 体视显微镜、生物显微镜、培养箱、烘箱、水浴锅。 5.2 用具 展翅板、硫酸纸、瓦楞纸片、三角纸、样品袋、小毛笔、养虫缸、酒精灯、解剖刀、手术剪、镊子、解剖针、 昆虫针、白瓷盘、指形管、标签纸、量筒、烧杯、玻璃棒、培养皿、载玻片、盖玻片等。 5.3 试剂 无水乙醇、乙醇溶液(30%、70%)、10%氢氧化钠溶液(或10%氢氧化钾溶液)、二甲苯、中性树胶、 醋酸红、蒸馏水、幼虫保存液(100mL75%乙醇溶液+1mL甘油)等。所用试剂均为分析纯。 6 检测与饲养 6.1 检测 根据荷兰石竹卷蛾的为害状对寄主植物进行检查。注意检查植物表面是否有食痕和昆虫排泄物, 是否有蛀孔与蛀屑。一般植物的受害部位在叶片、腋芽、花梗及细嫩的果实上。叶片扭曲、有丝状物包 裹、幼茎有蛀食隧道、果皮木栓化、有褪色及黑色斑点等都是典型的为害状。还要注意检查附近或包装 材料的缝隙处是否有老熟幼虫与蛹。如发现疑似蛹状物,用指形管盛装;如发现上述幼虫,摘取叶片,用 可封口塑料袋装;若发现成虫,直接用三角纸包装放入样品袋。上述管、袋均加标签,或编号,记录时间、 地点、寄主、采集人等,带回实验室。 2GB/T33125—2016 6.2 饲养 将幼虫连同寄主植物一起放入养虫缸内,置于25℃左右、相对湿度70%~75%的培养箱内饲养。 每天进行观察,如食料不足,可适当补充苹果屑作为食物,直至化蛹。对于蛹的饲养,可在养虫缸内放一 薄层瓦楞纸片,将蛹小心置于细沙或瓦楞纸上,盖上纱网盖,将养虫缸置于培养箱,在20℃~30℃、相 对湿度为65%的条件下饲养至成虫羽化。 7 标本的制作 7.1 针插标本 成虫标本可制作为针插标本。将羽化后成虫冷冻杀死(可置于冰箱-20℃下1h左右),软化后在 展翅板上展翅,制成针插标本。干成虫标本需回软化后制作。 7.2 浸渍标本 幼虫一般制作浸渍标本。将幼虫清洗干净后保存在幼虫保存液中。如果要备分子试验用,则可用 无水乙醇浸泡幼虫或成虫,并冷冻保存。 7.3 成虫外生殖器玻片标本 将成虫腹部取下,放入盛有10%氢氧化钠(或氢氧化钾)溶液的试管中,在沸水中加热5min~ 10min左右至腹部透明(或在水浴锅中加热到腹部透明);取出后放入蒸馏水中浸洗;将剩余的腹壁和 外生殖器放入醋酸红溶液中染色约2h,然后顺次放入30%、70%乙醇中各脱水10min,将腹壁和外生 殖器分开,再移至无水乙醇中脱水10min;最后置于二甲苯中透明,取出外生殖器置于载玻片上中性树 胶滴中,体视显微镜下整姿,尽量使雄外生殖器构造在视野中为正面图像;盖上盖玻片;风干或用烘箱 45℃下24h烘干,制成玻片标本。 8 实验室鉴定 8.1 卷蛾科的主要形态特征 体中或小型;多为褐、黄、棕、灰等色,并有条、斑纹或云斑;前翅略呈长方形,肩区发达,前缘弯曲,有 的种类雄虫前缘向反面折叠;静止时,两前翅平叠在背上,合成钟状;下唇须第1节常被有厚鳞,故呈三 角形;除头部有竖立的鳞毛外,身上的鳞片平贴;前翅翅脉均从基部或中室直接伸出,CuA2出自中室下 缘近中部处。后翅Sc+R1与Rs分离。 幼虫体圆柱形;体色多为深浅不同的绿色,有的白色、粉红色、紫色或褐色;趾钩二序或三序,环式; 前胸气门前的骨片有3根毛;肛门上方常有臀栉。 8.2 黄卷蛾族的主要形态特征 头部或多或少被有粗鳞毛。胸部光滑或有直立毛簇。有少数种类触角第二节有凹陷。下唇须向上 或向前伸。前翅前缘呈波状,静止时褶叠成吊钟状;花纹有基斑、中带和端纹,各斑有时分散成许多斑 点;R4和R5脉分离或共柄,R4脉末端止于翅尖或外缘上;雄性大多有前缘褶。后翅M3和CuA1脉分 离或同出于一点,但很少共柄。雄性外生殖器有广阔的抱器瓣和发达的抱器腹,抱器瓣基部有毛垫。爪 形突发达,背腹扁平而稍宽,匙状,末端钝。颚形突成两臂状在中央合并成钩。尾突发达、发育不全或缺 少。抱器背基突强烈几丁质化,呈横带状,中间间断呈齿状或全部消失。阳茎针长针状,有时消失。雌 3GB/T33125—2016 性外生殖器的囊导管中有管带。囊突呈匕首状、长角状、短剑状;有或无球端。少数种类无囊突。阳片 呈漏斗状。 8.3 荷兰石竹卷蛾的主要形态特征 8.3.1 成虫 具有雌雄二型现象,雄成虫较雌成虫小,触角各节有纤毛;前翅近矩形,休息时前翅覆于后翅上方, 呈钟罩状。 8.3.1.1 雄成虫(参见图C.1和图C.5) 雄成虫特征: ———翅展14mm~18mm,头、胸红棕色,腹部褐色具橘黄色斑纹,触角纤毛发达。 ———前翅浅褐色至红棕色,偶尔为蓝灰色,具深色网状纹;无前缘褶;基斑、中带、亚外缘横带深褐 色;基横带的外缘可见,中带、亚外缘横带明显。 ———后翅橙黄色,顶角、翅端、内缘(有时甚至端半部)深褐色,缘毛橙黄色。R1脉源于中室中央至 端部,M2和M3脉基部分离。 ———雄虫外生殖器(参见图C.3):爪形突长而宽,末端具片状突起,呈伞状,尾突直但不发达;颚形 突简单,末端具有不发达钩状突起;抱器瓣简化,抱器腹结构复杂,近中部有一大一小两个刺状 突,大的靠近基部,小的位于大的外围,末端圆无特化结构;抱器背基突完整,两侧延伸呈片状; 阳茎基环微曲,阳茎端膜内具少量、细小的微刺状角状器。 8.3.1.2 雌成虫(参见图C.2) 雌成虫特征: ———翅展16mm~24mm,头胸腹和雄虫相似。触角纤毛不发达。 ———前翅颜色与雄虫相似,但通常颜色稍浅,上有深色的网纹。中带不完整,中部缺失,亚外缘横带 缩减为亚顶角斑。 ———后翅橙色,内缘褐色,但顶角和翅端很少或不呈褐色。 ———雌性生殖系统(参见图C.4):囊导管细长骨化,交配囊比导精管囊小,交配囊上有一刺状囊突。 8.